细胞培养与传代指南

在生物医学研究中，细胞培养是一项基础且重要的技术。本文将介绍A549细胞系的培养条件以及细胞的传代和冻存步骤，以确保细胞在实验中的健康生长和状态良好。

培养条件

本细胞系来源于58岁白人男性肺癌患者，由DJGriad通过肺癌组织移植建立。

细胞培养的气相要求为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定在37℃，使用F12K培养基，补充10% FBS和1% P/S，以提供细胞所需的营养和支持。

细胞传代

细胞传代的频率与细胞的汇合度相关，如果细胞汇合度未超过80%，需将培养液收集并留存部分用于后续培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。

贴壁细胞的传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。
3. 显微镜下观察细胞，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
4. 将细胞悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 按1:2的比例分瓶传代，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代步骤

1. 采用半换液法，竖着放置培养瓶静置1小时，轻吸掉3ml培养基，补给3ml新鲜完全培养基。
2. 如需分瓶，可以将细胞悬液收集到离心管中进行离心，去除死细胞后补充培养基，维持活力。

细胞冻存与复苏

细胞冻存步骤如下：

1. 当细胞生长覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞完全变圆后终止消化。
3. 加入无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存管置于-80℃冰箱中存放24小时以上后转入液氮罐中。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出细胞冻存管后，快速置于37℃水浴中解冻。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，离心5分钟后弃去上清。
3. 用5ml完全培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，放入培养箱中继续培养。

尊龙凯时致力于提供高质量的细胞培养和生物医学解决方案，以满足科研需求并推动生命科学的发展。

细胞培养操作中，有些细胞在运输过程中可能会出现脱落现象。对此，建议及时处理，将培养液收集进行再培养，以保证细胞的活性和效果。