### 产品及特点

尊龙凯时推出的荧光定量PCR检测试剂盒基于探针法原理，具备以下独特特点：

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板即可开始实验。

2. 优化的组分：引物经过优化处理，确保高灵敏度。

3. 阳性对照提供：包含阳性对照，便于有效区分假阴性样品。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列中的高度保守区，从而避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 检测范围广：不仅适用于定性分析，还可进行定量检测，线性范围至少覆盖五个数量级。

6. 经济实用：产品可支持50次20μL体系的荧光定量PCR反应。

7. 研究专用：本产品仅适用于科研用途。

### 方法步骤

#### 一、DNA提取（样本制备区）

用户可选择任意方法提取纯化样品DNA，我司的试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

#### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，此步骤需在独立区域进行，以避免污染其他样品或试剂盒成分。

1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 每管加入45μL DEPC-H2O（建议使用枪头带芯）。
3. 在7号管中添加5μL的阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准样品，并放置于冰上待用。
4. 依次替换枪头，按照相似步骤稀释至6个标准曲线样品，放置在冰上待用。若不需制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

#### 三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数量，准备N+2个qPCR管（N个待检样品 + 1个阴性对照 + 6个阳性对照），向各PCR管中添加相应成分（详细说明书可向我司索取）。

#### 四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，样本添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后，立即进行扩增反应。

#### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应位置，按照以下扩增程序进行（详细说明书可向我司索取）。

#### 六、结果分析

若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，通过待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。

若未制作标准曲线，结果判定标准如下：

• 阳性对照：Ct值<30，明显指数增长，呈现典型的S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长期和平台期。
• 样本检测：Ct值<35，表明样品中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值则为阴性；Ct值在35-38范围内需复检，如复检结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

### 运输及保存

本产品应低温运输，储存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独放置，以防污染其他试剂。

通过尊龙凯时的高质量科研产品，助力您的研究更加高效与可靠。